Microscopia óptica y métodos de tinción

La histología es el estudio de los tejidos y órganos mediante la microscopia.

Al igual que la frase "la forma sigue a la función", las estructuras de los tejidos humanos están estrechamente relacionadas con sus funciones.

Al integrar la histología con otras disciplinas, como la bioquímica, la biología celular y la fisiología, es posible comprender mucho mejor el funcionamiento del organismo.

Aunque hay muchos tipos de microscopia, la microscopia óptica o MO es la más común, en gran medida por lo práctica que resulta tanto en el ámbito clínico como en la investigación.

Otros tipos de microscopia son la sonda de barrido, la ultravioleta, la virtual y la microscopia electrónica o ME.

La microscopia óptica puede subdividirse en función de la técnica específica que se utilice, como la microscopia de campo claro, la de inmunofluorescencia y la de campo oscuro.

Nos centraremos principalmente en la microscopia de campo claro y en algunos de los diversos métodos de tinción que la acompañan.

La microscopia de campo claro no solo es el tipo más sencillo de microscopia óptica, sino también el tipo con el que la mayoría de la gente está familiarizada, ya que utiliza la luz ordinaria para examinar el tejido teñido a gran aumento.

Para poder visualizar el tejido, primero hay que prepararlo adecuadamente.

El método más común de preparación de tejidos sigue tres pasos principales.

El primero consiste en fijar o preservar el tejido mediante formalina.

El siguiente paso es el procesamiento del tejido, que es el que elimina el agua del tejido.

Para ello se utiliza etanol, que sustituye el agua de todas las células, y xileno, que elimina el etanol disolviéndolo, lo que facilita la incrustación del tejido en parafina.

El tercer paso consiste en incrustar el tejido en cera de parafina, que elimina el xileno del tejido y también se solidifica en un "bloque de parafina" que facilita la sección o el corte del tejido en rodajas muy finas.

Para ello se utiliza una máquina llamada micrótomo, que la mayoría de los laboratorios utilizan para cortar el bloque de parafina en rodajas de 4 μm de grosor.

A continuación, se monta el corte de parafina en un portaobjetos de vidrio y se tiñe el tejido para facilitar su visualización al microscopio.

La tinción más común es la combinación de hematoxilina y eosina, abreviada como HyE.

Esta imagen de un conducto pancreático se tiñó con HyE y la imagen de la derecha, solo con hematoxilina.

La hematoxilina es un colorante básico con carga positiva y teñirá las estructuras con carga negativa de color púrpura o azul oscuro.

Debido a esta característica, los componentes tisulares que se tiñen fuertemente con colorantes básicos suelen denominarse estructuras basófilas.

Los núcleos, los ribosomas y el retículo endoplásmico rugoso son estructuras basófilas debido a la carga negativa del ADN y el ARN que contienen.

La matriz del cartílago también es una estructura basófila común.

Por otro lado, la eosina es un colorante ácido con carga negativa que tiñe de rojo o rosa las estructuras con carga positiva o eosinófilas.

Algunas de las estructuras comúnmente eosinófilas incluyen colágeno, proteínas citoplásmicas y mitocondrias.

Las mitocondrias son especialmente eosinófilas y se tiñen fuertemente de eosina, para dar a las células con muchas mitocondrias, como las musculares cardíacas, una coloración rosa oscuro.

Como es de esperar, se pueden utilizar otras tinciones para ayudar a visualizar y examinar estructuras específicas que podrían no verse tan fácilmente con HyE.

La tinción de ácido periódico-Schiff o PAS también se utiliza habitualmente.

Esta tinción colorea los hidratos de carbono complejos de un color rojo oscuro o magenta, por lo que es útil para identificar el glucógeno en células como los hepatocitos y las células musculares.

En esta imagen de hepatocitos, el tejido se tiñó con PAS y se le aplicó contratinción con hematoxilina.

Así es posible ver el glucógeno de color magenta oscuro, además de los núcleos de los hepatocitos, que se tiñen de color púrpura con la hematoxilina.

Los azúcares que se encuentran en el moco también se tiñen bien con el PAS, como el moco que recubre el estómago, que se tiñe intensamente de magenta oscuro en esta imagen.

La tinción PAS también tiñe el tejido conjuntivo y las membranas basales, como la membrana basal glomerular y la membrana basal de la cápsula de Bowman que se encuentran en los riñones.

Esta sección se tomó del intestino delgado y se tiñó con tricrómico de Masson.